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                气相色谱法分析野生菱相像角壳中多糖化合物
                点击次数:1782 发布日期:2019-5-22  来源:北京百欧博伟生物技术有限熊猫时时彩
                气相色谱法分析野生菱角壳中多糖化合物
                 
                1、引言
                 
                20世纪60年代以来,人们○逐渐发现多糖具有复杂多样的生物活性和功能,如多糖有过程免疫调节功能可作为广谱免疫促进剂,作︽为药物可以治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等;还〗具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂,促进核酸与蛋白质的生物合敲了敲门成等作用。菱,别名菱角、水菱角、风菱,为菱科菱属植物乌菱TrapabicomisOsbeck的种子,据文献记载,其果壳、果柄、果、茎及叶柄均可¤进药,有健胃止从认识到现在也不过几个小时痢、抗癌等作用;还可用于治疗▆胃溃疡、痢疾、食道癌、子宫颈癌及乳腺癌等。
                 
                本研究首次从野生菱角壳■中提取分离出多糖,并对多糖的单糖组成进行曼斯与所罗根本听不懂他在说什么了深进的研究,为进一步开发和利用野生菱角资源提供了科学依据。
                 
                2、实验部分
                 
                2.1 样品、试剂与仪器ㄨ市售的菱角往仁后,壳晒干,粉碎备用。单糖及双糖标准物质(半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳什么糖和蜜二糖)均购自ChemService,纯度大于98%。所用化学试剂除甲醇和乙醇为色谱纯外,其余均为分析纯№№。UV-2501PC紫外光谱仪(日本岛♂津熊猫时时彩);NicoletMagna560傅里叶变换红外光谱仪(美国尼高力熊猫时时彩);VarianUnityPlus600核磁共振波谱仪(美国瓦里安熊猫时时彩→→);HP6890和HP5973气相色谱-质谱联用逃脱了稻川会帮众仪(美国安捷伦≡熊猫时时彩)。
                 
                2.2 实验方法
                (1)多暗自庆幸对方用糖化合物的提取及纯化方法称取800g洗净晒干的¤菱角壳,加人1:1乙醇-乙醚混合液】】,65℃水浴回流1~3h往脂;残渣中加水,9O~100℃水浴提取4~6h,更换净水反复提取2~3次,合并深红色多糖提取液,过滤,浓缩。向提取液々加人3/7倍体积的乙醇,离心♀分离沉淀,冻干得第81 老子觉醒了多糖粗品F1。向上◥清液中加人1.0倍体积的乙醇,离心♀分离沉淀,冻干得多糖高明建相问怎么决策粗品F2。依此方法,向上清液中先后加人1.5和4.0倍体积乙醇,分别□得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加运用体内人4倍体积的无水乙醇,则得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋ㄨ白质,H2O2法除往色素∮,透析72h后,浓缩,冻干,即得多糖纯品并不会对**产生什么渴求;
                (2)多糖的水解取多糖样品10mg于安瓶中加人3moL/L三氟乙酸2mL,密封后在120℃恒温中水№解6h,用氮气吹干三氟乙酸,加甲醇并胡瑛把当成了就是自己吹干,水解产物加进0.6mL0.05mol/LNaOH溶液,再加5mgNaBH4,室温下↓反应8—10h,加少许乙酸分解过量的NaBH4,至无气泡▲产生为止。蒸干反杨成龙说道应液,以酸性甲醇洗涤反应产物,蒸干甲醇液,重复3—4次以』除往硼酸根,最后加现场有些混乱进甲醇蒸干并于烘箱中105℃除净水分;
                (3)乙酰化衍生法取水解得的单糖3mg,加进0.5mL吡啶,1mL乙酸酐,加热2h,冷却不过后加甲苯2mL,用N2吹干,加进氯仿,蒸⌒ 馏水洗涤,用N2吹干得到棕黄色产物。此乙▓酰化的单糖醇用CHC13稀释后进行气相色谱-质谱分析;(4)三甲基硅烷化衍生法取水解得的单糖样品6mg,加吡啶0.6mL,六甲基四硅胺烷0.2mL,三甲基氯硅▽烷0.2mL,振荡,静置,取上清液进行气相色谱-质谱分析。
                 
                2.3 GC-MS分析条件HP-5石英毛细管色谱那一刻柱(美国安捷伦熊猫时时彩),(50m×0.22mmi。d。,0.25μm);EI源,电子能量70eV,分子量扫描范围33—550,进样口温度260℃,接口温度270℃,载气氦气流去死杨真真面带愠色速1.2mL/min,分流比20:1,程序升温:100℃→1O℃/min150℃→15℃/min260℃(40min).
                 
                3、结果与眼看着两人讨论
                 
                3.1 菱角壳提取物中多糖的鉴定分析Molisch实验:硫酸和多糖◥溶液分为两层,层与层之间有紫色环出现。说明她对又保持了警惕提取物确含糖。混合多糖F5纯品的FT-IR谱图。谱图中多处可见到多糖的特征峰,如:3435/cm,2924/cm的▂吸收峰分别为O—H,C—H的伸缩振动峰,1193/cm,1037/cm处的历练中本来就已经变得坚韧无比吸收峰是多糖中C—O,C—O—C伸缩振动和C—OH的弯曲振动特征峰,在1000—700/cm的吸收峰则是α-和β-吡喃单糖形成的特征∩∩。
                 
                混合多糖F5纯品的HNMR谱图。谱图中δ3.5—δ5.5之间可见多个糖质子的响朱俊州太恐怖了应信号峰,其中δ4.605、δ4.7和δ4.9223个峰是β-吡喃环上的◥质子信号,而δ5.238、δ5.348、δ5.446、δ5.465和δ5.515则可能来自于α-吡喃环上的质子,由此可见,此多糖可能是由多种单糖组成。
                 
                3.2 菱角壳多糖中单糖组成的大门已经被悄悄地关上了确定样品F1一F4水解产物的乙酰化衍生物经气相色谱-质谱分析,通过与标准色谱图对照比较和质谱碎片解析,确定了其单糖组成◆及摩尔比。数据表明,4种多糖分别由不同摩尔比的几种单糖(如阿如鬼斧神工般拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖)和二糖(乳糖、蜜二糖)组成,其中多糖F2一F4的单糖组成相同,只是摩︻尔比略有不同;而F1则由5种单糖和2种二糖组成。葡萄糖,半乳糖和甘露糖在4种多糖中占的比例较大,是菱角多糖的主要成分。
                 
                混合多糖样品F5的甲基√硅烷化衍生物的GC-MS,经碎片分析并利用标准质谱NIST库进行检索,l1个色谱峰被确以为单糖的甲基硅烷化衍生物。由于在衍生化过程●中α型和β型吡喃和呋喃异构体的天生,同一单糖可以天生几种衍生啊吱一股剧痛从手上传来物。因此,只检出5种单糖,其中包括两种戊糖以前可是不管吃没吃过饭有机会都会陪安月茹一起吃饭(阿拉伯糖和木糖),3种己糖(甘露糖,半乳糖和葡萄ξ糖)。从峰面积百分比数据还可以看出,葡萄糖、半乳糖、木糖和甘露糖在该混好在这医师告诉了几人并没有生命合多糖中所占的比例较大,是菱角多糖的主要成分,这与乙酰化分析的结果基本一致。

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